PCR反應的基本成分
更新時間:2017-11-09 點擊次數(shù):4990
模板DNA(待擴增DNA)、引物、4種脫氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和適宜的緩沖液。類似于DNA的自然復制過程,其特異性依靠于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
①模板DNA的高溫變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作預備;
②模板DNA與引物的低溫退火(復性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
③引物的適溫延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保存復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保存復制鏈重復循環(huán)變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的“半保存復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。